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保存專用血清時要多注意以下幾點News
保存專用血清時要多注意以下幾點
更新時間：2022-04-18 點擊次數(shù)：1045次
專用血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體，具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學(xué)成分組成，這些化學(xué)成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白，甘油三酯，總膽固醇，谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。
專用血清來源于非免疫的鼠宿主，經(jīng)過脂質(zhì)萃取PBS溶液透析，改善其透明度。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上，37℃度孵育10-30分鐘，清除血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。注意：封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白，且與一抗來源不同，可用與二抗相同來源的封閉血清。
專用血清的保存應(yīng)該注意以下幾點：
1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中，4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2、熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活。除非必須，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物增多，而且還會影響血清的質(zhì)量。補體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用，平滑肌細(xì)胞收縮，肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺，增強吞噬作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
